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供應 極敏型 ECL化學發光底物試劑盒
規  格:
ECL-F-100
價  格:
328/
數  量:
 交貨地:
發布時間:
2019-05-21
 有效期:
255 天
備  注:
儲存:建議置于4 oC避光保存,一年穩定。
 
一、產品簡介:
本試劑盒是非放射性發光系統,用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸,靈敏度高,背景低,最低檢測靈敏度可達低飛克(femtogram)級乃至飛克級以下,適用于檢測極痕量蛋白或核酸。發光信號持續時間較長,半小時以后仍可維持75%的發光,便于反復曝光操作。與其他 ECL 化學發光底物相比,可顯著減少樣本及一抗和二抗的使用量。
 
二、原理:
極敏型ECL化學發光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以HRP標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于本產品配制的ECL工作液中,室溫孵育數分鐘,HRP使工作液中的魯米諾(Luminol)氧化并發光,試劑中添加的增強配方可以使這種發光得到極大增強,從而能夠檢測更少量的蛋白質或核酸。此光經X光膠片或者電子裝置感光記錄下來,可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。
 
三、產品優點:
低飛克級靈敏度——極高的靈敏度,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,最低可檢測飛克(femtogram)級以下的蛋白。
信號穩定——發光時間較長,能進行多次曝光,半小時以后仍可維持75%的發光。
信號強——發光信號比對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系得到極大增強。
穩定性較高——試劑盒可在4度穩定存放一年。
節約抗體——需要更少(稀釋更多)的一抗和二抗,特別節省抗體(推薦用量:一抗0.01-0.2μg/mL,二抗2-10ng/mL)。
 
四、使用方法:
1. 印跡膜制備:執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發光底物,檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。
2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均勻并盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約2分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。
3.蛋白或核酸信號顯現:
1). 用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜完全干燥;
2). 將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡;
3). 用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光;
4). 根據信號的強弱適當調整曝光時間,也可選擇不同時間多次曝光,以達最佳效果。
 
五、安全性:
無特殊毒性,按普通化學品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸,請立刻用大量清水沖洗。
 
六、注意事項:
1.由于不同品牌的抗體質量不同,以及抗體的保存條件和保存時間的不同,初次使用時建議對抗體用量進行優化,以取得最優效果。
2.勿將ECL化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下,否則會導致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時間暴露在陽光下,實驗室光照對試劑盒影響不大;除了X光膠片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作。
3.使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態;使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。
4.使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時一定要用不同的槍頭,互相污染可能導致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑。
5.印跡膜與ECL工作液孵育后約3 min時發出的熒光最強,隨后熒光會隨著時間的延長而緩慢減弱,至30min仍可保持約75%的光信號;蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間;使用過少的ECL工作液不利反應進行,為達節約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。
6.使用生物素/親和素體系時,避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素,容易產生非特異性信號。
7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現顆粒狀斑點,避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子,建議使用塑料的平頭鑷子。
9.疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,應避免使用NaN3,如必須使用,濃度不要超過0.01%。
10. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干凈。
11.本產品僅供研究使用。

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